华因康新一代高通量测序技术之应用篇
在过去几年里,新一代DNA 测序技术平台得到迅猛发展,各种新技术犹如雨后春笋般涌现。2010 年12 月底美国《福布斯》封面文章标题为“基因测序科技突飞猛进”,该文章对新型基因测序仪器做了介绍。目前DNA 测序技术已广泛应用于生物学研究的各个领域,很多生物学问题都可以借助高通量DNA 测序技术予以解决。过去三年,大规模测序已经发展为主流的测序技术,该测序技术令DNA 测序费用降到了以前的百分之一。
一、第一代高通量测序技术的兴起背景与市场现状
Sanger 测序法一直以来因可靠,准确,可以产生长的读长而被广泛应用,但是它的致命缺陷是速度相当慢。随着人类基因组计划的完成,人们进入了后基因组时代,即功能基因组时代,传统的测序方法已经不能满足深度测序和重复测序等大规模基因组测序的需求,这
人类基因组测序相关历史回顾: |
些促使了新一代DNA 测序技术的诞生。
2005 年, 454 生命科学公司推出了市场上首个新一代测序平台GenomeSequencer 20。随后,Illumina 和ABI 公司也陆续推出了不同类型的测序系统,同样是瞄准了测序这个潜在的巨大市场。
测序领域进展迅速,方法和检测手段也各种各样。目前,在测序方法上,有连接法、合成法、Nanopore 技术。连接法主要有Complete Genomics 与ABI;合成法有太平洋生物科学公司(PacBio)SMRT 测序,Heliscope 单分子基因测序,Ion Torrent,Illumina 系列平台,454 系列平台。Nanopore 技术主要有生物纳米孔(α溶血素)和固态纳米孔(石墨烯等)。
产地 | 平台及公司名称 | 测序方法 | 检测方法 | 大约读长(碱基数) | 优点 | 相对局限性 |
国外 | 基因组测序仪FLX 系统(Roche) | 焦磷酸法 | 光学 | 800-1000 | 在第二代中最高读长;比第一代的测序通量大 | 样品制备较难;难于处理重复和同种碱基多聚区域;试剂冲洗带来错误累积;仪器昂贵 |
HiSeq 2000/MiSeq(Illumina) | 可逆链终止物和合成测序法 | 荧光/光学 | 2x125 | 很高,操作简单 | 仪器昂贵;用于数据删节和分析的费用很高 | |
SOLiD 5500xl 系统(ABI) | 连接测序法 | 荧光/光学 | 25-35 | 很高测序通量;在广为接受的几种第二代平台中,所要拼接出人类基因组的试剂成本最低 | 测序运行时间长;读长短,造成成本高,数据分析困难和基因组拼接困难;仪器昂贵 | |
Heliscope (Helicos) | 单分子合成测序法 | 荧光/光学 | 25-30 | 高通量;在第二代中属于单分子性质的测序技术 | 读长短,推高了测序成本,降低了基因组拼接的质量;仪器非常昂贵 | |
国内 | PSTAR-II (HYK) | 连接测序法 | 荧光/光学 | 30bp | 测序通量高;准确度高;灵活性高;价格低,测序试剂均自主研发,大大降低测序价格 | 读长短,对庞大的基因组拼接相对困难,但对于小片段基因分析十分适用,成本较低 |
二、华因康PSTAR-II新一代测序技术主要应用方向
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(三)环境微生物检测、农业与食品安全 主要包括:育种基因检测,转基因检测,宏基因组测序等 环境污染伴随着与之相关的微生物菌群,对该类微生物菌群的鉴定与研究,并从中取得应用成果,是目前环境治理、污水处理、垃圾与废弃物可再生处理领域迫切需要深入研究的课题。利用基因技术进行作物育种以及转基因安全评估与检测是农业领域最近十年新兴的研究方向。食品中微生物种类和含量检测是食品安全中重要的一个环节。 华因康PSTAR-II 高通量测序技术,可对复杂组成的样品进行统一的DNA 测序,并提供足量的数据信息。经过数据分析,可获得复杂样品的DNA 组成信息,进而分析其内的物种组成、含量以及根据物种的基因,预计其相关的生物功能。在环境领域,可用于分析污水的总菌落构成与菌种的变异情况,同时也可用于污水处理中活性功能菌群分析与菌群功能鉴定以及在此基础上的进一步优化;在农业与食品领域,高通量可方便的测定农业作物的基因组草图,鉴定转基因物种的基因序列,检测作物菌群的构成,食品污染的微生物构成等方面;同时,高通量测序在农业作物基因组草图构建上,速度快,成本低准,确率高,可快速的测定农作物以及经济作物的基因组序列,为育种筛选、作物优培等提供了良好的试验手段和检测工具。 (四)功能基因组学等方面研究 主要包括:转录组测序,表达谱测序,MicroRNA 测序,甲基化测序等功能基因组学( Functuional genomics ) 又往往被称为后基因组学(Postgenomics),它利用结构基因组所提供的信息和产物,发展和应用新的实验手段,通过在基因组或系统水平上全面分析基因的功能,使得生物学研究从对单一基因或蛋白质得研究转向多个基因或蛋白质同时进行系统的研究。 高通量测序技术结合常规的生化技术,为功能基因组学研究打开了一扇新的大门,加速了后基因组学的研究进展。通过对样品转录组谱的测序,可获得样品的总转录情况。对比不同的样品,经过生物信息学处理,可获得样品间的表达差异,进而揭示不同基因在不同组织/样品的转录表达情况,为研究样品的功能差异提供了坚实的数据基础。在miRNA 领域,可分析样品内的总miRNA 构成,以及其含量,并能够从大量数据中发现新的miRNA 种类。 高通量测序技术由于其巨大的数据产出,能够总整体水平上分析、比较DNA 突变、RNA 表达差异、甲基化水平、功能基因的开关等的差异,从而为蛋白质研究、信号通道研究、蛋白与DNA 作用研究、细胞分化与发育研究、表观遗传研究提供有利的数据证据支持。 |